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第九十四章 革兰氏染色法 浸出和压榨（第4页）

“革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，取菌种培养物涂片、干燥、固定。

要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色。”

“涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性，然后用酒精灯的火焰轻微加热玻片，目的就是让涂层固定在涂抹位置，火焰固定不宜过热，过热就把细菌烫死了，以玻片不烫手为最好。”

“然后咱们加热草酸铵，草酸铵结晶紫染一分钟。

草酸铵这个东西是木屑和火碱在240～250c共熔，首先制取草酸盐，再经酸化即得草酸。

草酸再与尿素反应可得草酸铵。”

“再用蒸馏水冲洗玻片，再加碘液覆盖涂面染约1分钟，而碘液可以用纶布碳化之后，加乙醇之后溶解，过履溶液便是碘液。”

“然后水洗，用吸去水分。

加95酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。”

“最后加稀蕃红染色液染1分钟后，蒸馏水冲洗。

干燥，镜检。”

“番红是从藏红花柱头中提取的一种然染色剂，为橙红色粉末。

是咱们以后植物组织实验中最常用的染色剂之一，你们要学会自己动手制作。

可以用水浸泡熬煮藏红花柱头可得番红溶液，也可用酒精浸泡藏红花柱头研磨的粉制得。”

“其实这个原理很简单，通过初染和碘液媒染后，在细菌的细胞壁内形成了不溶于水的番红与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩。”

“再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把番红与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解。”

“薄而松散的肽聚糖网不能阻挡番红与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色，染色的差异主要是阴性与阳性细菌细胞壁的差异所引起的。

最后的结果就是革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。”

“以后你们一定要注意在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果，假阳性主要是由于脱色不完全，可能是由于涂片过厚，或者是染色过度，导致脱色不完全。”

“假阴性可能是因为细胞固定过度，造成细胞壁通透性的改变，而出现假阴性结果；另外，细胞培养时间太长，可能已经有部分细胞发生死亡或者自溶，也导致细胞壁通透性的改变而出现假阴性结果。”

“魏嗣，熊商，田因齐，赵语，韩康，赢疾，无疆。

带领你们的师弟按照我的方法，分头去制作碘液，草酸铵，蕃红等物。

然后继续你们的试验。”

“诺，先生，可是何为细胞壁？先生，我们到现在也是一头雾水，完全不知啊，先生的整个流程我们都听懂了，也知道要怎么干。”

“惟独这细菌的细胞壁。

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。”

咳咳咳。

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真是丢人啊，到底不是老师，怎么把这么重要的事情都忘了，他摸得给人上课居然连细菌的细胞结构都不给人讲清楚，这要是后世会不会被学生嘲笑？